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Title :魚類の性決定と性分化機構の生理学的、分子生物学的研究
Title alternative :Studies of Mecteinism of sex determination and sex diferentiation in fish
Authors :中村, 將
小林, 亨
平井, 俊朗
Authors alternative :Nakamura, Masaru
Kobayashi, Tohru
Hirai, Toshiaki
Issue Date :Jun-2005
Abstract :平成14年度~平成16年度科学研究費補助金(基盤研究(B)(1))研究成果報告書
研究概要:魚類では、雌雄異体現象の他に雌雄同体現象が知られている。雌雄同体現象には一個体の生殖腺内に成熟した卵巣と精巣を同時に持つ種、雌から雄、または雄から雌に性転換する種、雄、雌どちらに何度でも性転換する種などが知られている。このことから、魚類の性決定、性分化機構は、他の高等な脊椎動物と異なり、多様で可塑性に富んでいるのが特徴である。本研究では魚の性の多様性と可塑性を支える機構を解明するために、はじめに雌雄異体魚の性分化機構、即ち、発生に伴い未分化生殖腺が卵巣又は精巣に分化する機構を形態学的、生理学的、分子生物学的手法を用いて解明に取り組んだ。次に性転換機構の解明にも取り組んだ。性分化機構の解析のために、遺伝的に雌雄産み分けられたティラピアを用いて卵巣分化時に発現が増加、減少する遺伝子を調べた。その結果、発現が増加するものとしてFox12が同定された。Fox12は、アロマターゼ発現の転写調節活性化能を促進することが明らかとなった。一方、精巣分化に発現が増加、減少する遺伝子の検索を行い、発現が上昇するもの6個、低下するもの21個を得て現在解析中である。性転換機構については主に雌から雄へ性転換するミツボシキュウセンとカンモンハタを使い調べた。両種ともにアロマターゼ・インヒビターにより雌は雄へと性転換することを明らかにした。アロマターゼ・インヒビターと女性ホルモンと同時に処理すると性転換が抑制されることが明らかになった。このことから性転換には、女性ホルモンが低下することが重要であるかことが示された。卵巣の生体外器官培養による精巣への転換、成熟精子形成と言う今後の性分化、性転換機構の解明に有効な手段となる画期的方法を確立した。
研究概要:Our studies indicate that endogenous estrogen biosynthesis occurs in undifferentiated XX gonads but not XY gonads before the appearance of any morphological sexual dimorphism, and that endogenous estrogens are required for ovarian differentiation. To identify the down-stream gene products during ovarian and testicular differentiation, we performed subtractive hybridization using mRNA derived from normal and estrogen treated XY gonads. We identified ten regulated gene products, seven of which related to ovarian differentiation and three to testicular differentiation. Two out of the ten gene products were expressed in germ cells, whereas the others were expressed in somatic cells. Sex reversal was induced in genetically sex-controlled female tilapia by a 30 days treatment with methyltestosterone(MT) or aromatase inhibitor(AI). Gene expression profiles were compared with a control group by modified differential display at Day 12 (initiation period of sex differentiation) and Day 30(just after completion of sex differentiation). At 12,16 up-regulated and 21 down-regulated genes were identified, where at Day 30,14 up-regulated and 19 down-regulated genes were identified. These genes were cloned and sequenced, followed by homology searches and gene expression analysis. In this study, we examined the mechanism of sex change in fish using a protogynous species. AI induced compete a sex change from female to male. In contrast, AI and estradiol-17b(E2) in combination did not bring about the sex change. These results strongly suggest that endogenous E2 has critical role in sex change. Using in vitro tissue culture, we succeeded in inducing restructuring complete ovarian tissue to mature testicular tissue with sperm in 3-4 weeks. To the best of our knowledge, this is the first demonstration of "in vitro sex change" from ovary tissue to a complete testis in vertebrates. This ability to experimentally induce this change has important implication for future research on sex determination and sex differentiation in vertebrates.
未公開:P.6以降(別刷論文のため)
Type Local :研究報告書
Publisher :中村將
URI :http://hdl.handle.net/20.500.12000/16207
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